近日，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所煙草病蟲害防控創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)基于CRISPR/Cas13技術(shù)建立了番茄斑萎病毒檢測(cè)體系。研究通過(guò)RPA等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)與CRISPR/Cas13系統(tǒng)對(duì)RNA探針的附帶剪切功能，建立一種新的病毒檢測(cè)體系，可有效檢測(cè)茄科作物與傳毒介體薊馬中的番茄斑萎病毒。相關(guān)研究成果發(fā)表在《微生物學(xué)前沿（Frontiers in Microbiology）》上。

據(jù)楊金廣研究員介紹，番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）屬布尼亞病毒科（Bunyaviridae）番茄斑萎病毒屬（Tospoviruses）成員。由于其寄主范圍廣泛，危害嚴(yán)重，是世界10大最嚴(yán)重危害性植物病毒之一，在我國(guó)經(jīng)濟(jì)作物上發(fā)生嚴(yán)重，生產(chǎn)上迫切需要開發(fā)一種更加靈敏、快速的檢測(cè)方法。

CRISPR/Cas系統(tǒng)通常作為基因編輯工具，該團(tuán)隊(duì)體外合成的活性Cas13a蛋白可與TSWV靶標(biāo)N基因crRNA特異性結(jié)合，構(gòu)建CRISPR/Cas13系統(tǒng)，通過(guò)該系統(tǒng)附帶剪切功能，剪切RPA反應(yīng)檢測(cè)體系中的RNA探針，基于熒光強(qiáng)度變化，實(shí)現(xiàn)病毒定量檢測(cè)目的。該技術(shù)體系對(duì)番茄和西花薊馬中TSWV檢測(cè)具有高度靈敏度和特異性，最低檢測(cè)TSWV拷貝數(shù)可達(dá)2.26×102?copies/μL，優(yōu)于實(shí)時(shí)熒光定量pcr技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)單頭介體內(nèi)TSWV定量鑒定檢測(cè)，對(duì)于TSWV病毒病精準(zhǔn)預(yù)防具有重要實(shí)踐價(jià)值。

煙草所碩士研究生張萬(wàn)紅和焦裕冰博士為論文第一作者，楊金廣研究員為論文通訊作者。該研究得到中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技創(chuàng)新工程、煙草綠色防控重大科技項(xiàng)目、云南省煙草公司科技計(jì)劃、四川省煙草公司科技計(jì)劃和河南省煙草公司洛陽(yáng)市公司科技計(jì)劃等項(xiàng)目資助。