雪茄煙及其煙葉原料，在存放不當(dāng)時(shí)，均有可能出現(xiàn)霉菌生長(zhǎng)的情況。為明確導(dǎo)致某產(chǎn)區(qū)雪茄煙葉霉變的元兇，我們嘗試開(kāi)展了以下工作。

首先，選取發(fā)生霉菌的煙葉樣品一批，置于超凈工作臺(tái)中，用接種環(huán)挑取煙葉表面霉菌于PDA固體培養(yǎng)基中，在28℃恒溫培養(yǎng)觀(guān)察。待長(zhǎng)出菌落后，并用接種環(huán)挑取霉菌接種到PDA中做有規(guī)則的劃線(xiàn)，經(jīng)過(guò)多次劃線(xiàn)得到純種9株單菌株，其中4株為煙梗表面篩選，5株為葉肉表面篩選。

注：上圖為煙梗提取菌株，從左到右，從上到下，依次編號(hào)為1～4

注：上圖為葉肉提取菌株，從左到右，從上到下，依次編號(hào)為5～9

將分離菌株于28℃恒溫培養(yǎng)7 d后，收集菌絲體經(jīng)液氮研磨，高速離心等操作后，進(jìn)行真菌ITS區(qū)PCR擴(kuò)增回收及序列測(cè)定。測(cè)序得到分離菌株ITS部分序列，將所得序列通過(guò)Blast程序與GenBank中核酸數(shù)據(jù)進(jìn)行同源性比對(duì)分析。最終，分子生物學(xué)鑒定結(jié)果如下。